什么是HPLC？
指高性能液晶圖形y。 輸液泵、注射器(自動(dòng)取樣器)、色譜柱烤箱，檢測(cè)器等構(gòu)成。 這是一種按成分分離樣品的技術(shù)，可以確認(rèn)(定性)什么樣的東西、裝了多少(定量)，并回收分離出的成分(分選色譜法)的正平方根。
日立Primaide
日立Chromaster
日本戰(zhàn)爭(zhēng)聯(lián)盟
水泵
為了用自動(dòng)取樣器注入樣品，用色譜柱分離后用檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè)，流動(dòng)相需要流動(dòng)的泵。 泵有以下3種泵。
等靜壓泵
在保持流動(dòng)相組成一定的狀態(tài)下使用。 GPC分析時(shí)使用的送液泵數(shù)量為1臺(tái)。
低壓梯度泵
在送液泵前設(shè)置電磁閥等，將多個(gè)流動(dòng)相混合。 由于在送液泵的跟前混合流動(dòng)相(在混合時(shí)沒有施加泵的壓力的意義上)，低壓梯度我叫它泵。 1臺(tái)送液泵就可以進(jìn)行梯度。 導(dǎo)入時(shí)的初期成本得到控制，因?yàn)橹挥幸慌_(tái)送液泵，所以運(yùn)行成本也得以控制。
高壓梯度泵
每混合一個(gè)流動(dòng)相需要送液泵，2液梯度時(shí)需要2臺(tái)泵，4液梯度時(shí)需要4臺(tái)泵。 根據(jù)各流動(dòng)相的濃度比率調(diào)整流量，供液后混合。 由于在送液后混合了流動(dòng)相(在混合時(shí)施加了泵的壓力的意義上)，高壓瞬變我叫它泵。 格蘭特的延遲會(huì)減少。 因?yàn)樾枰嗯_(tái)泵，所以導(dǎo)入時(shí)的成本會(huì)變高。
低壓梯度
高壓瞬變
檢測(cè)器
檢測(cè)分離成分的模塊。 根據(jù)樣品的種類區(qū)分使用檢測(cè)器。 例如，如果是有UV吸收的樣品，可以用UV-VIS檢測(cè)器或PDA檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè)。 檢測(cè)器的種類有以下幾種。
UV-VIS探測(cè)器
從紫外可見光區(qū)域的吸收波長(zhǎng)的樣品用1波長(zhǎng)的吸光度進(jìn)行檢測(cè)。 用于檢測(cè)具有芳香環(huán)或雙鍵的有機(jī)化合物。
PDA檢測(cè)器
用多波長(zhǎng)吸光度檢測(cè)具有紫外至可見區(qū)域吸收波長(zhǎng)的樣品。 UV-VIS檢測(cè)器僅限于設(shè)定的1波長(zhǎng)(或2波長(zhǎng))的測(cè)量，而PDA檢測(cè)器可以同時(shí)測(cè)量某一定范圍的色譜圖，因此可以獲取時(shí)間、強(qiáng)度、波長(zhǎng)的三維數(shù)據(jù)。 是討論分析條件時(shí)有效的檢測(cè)器。
RI檢測(cè)器
檢測(cè)折射率。 糖、酒精等幾乎所有的樣品都可以檢測(cè)出來，但缺點(diǎn)是靈敏度低。 多用于GPC分析。 梯度分析是不可能的等軸測(cè)使用分析。
熒光探測(cè)器
檢測(cè)吸收激發(fā)波長(zhǎng)的光而發(fā)出的光(熒光)。 不發(fā)熒光的樣品可以通過衍生化進(jìn)行檢測(cè)。 可以以比UV-VIS檢測(cè)器高50~200倍左右的靈敏度進(jìn)行分析。 用于氨基酸、維生素和類固醇等的分析。
NQAD檢測(cè)器
使流動(dòng)相軟化，使水分凝結(jié)在殘留的氣溶膠傳播狀態(tài)的微粒子上，用激光進(jìn)行檢測(cè)。 可以檢測(cè)非易失性半揮發(fā)性物質(zhì)。 可以進(jìn)行梯度分析，可以以高靈敏度進(jìn)行檢測(cè)。
日立5430二極管陣列探測(cè)器
日立5440熒光探測(cè)器
HPLC的檢測(cè)器除了上述以外，質(zhì)譜計(jì)來刪除它。 質(zhì)譜分析是將分子離子化，那個(gè)m/z這是一種可以通過測(cè)量來測(cè)量分子質(zhì)量的裝置。 作為縮寫有時(shí)會(huì)記載為MS，讀作MAS，但日本質(zhì)量分析學(xué)會(huì)推薦使用mes的稱呼。 質(zhì)譜計(jì)中具有代表性的東西有以下幾種。
四極質(zhì)譜儀
分離質(zhì)量電荷比的離子并分析質(zhì)量。 由4根棒平行捆扎而成，也稱為四極。 對(duì)置的桿賦予相同的電位，對(duì)相鄰的桿賦予相反的電位。 另外，桿中流過直流和高頻的交流。 調(diào)整4根棒的電壓送入離子后，只有一定范圍的質(zhì)量電荷比的離子可以穩(wěn)定地通過。 像這樣四極質(zhì)譜儀通過只提取特定的離子(SIM)可以高靈敏度地定量。 另外使直流和高頻交流電壓連續(xù)變化掃描分析で質(zhì)譜也可以獲得。
三重四極質(zhì)譜儀
與四極型質(zhì)譜儀相比，這是一種可以更高靈敏度定量的質(zhì)譜儀。 2個(gè)四極隔著碰撞室(碰撞池)串聯(lián)連接而成。三重四極質(zhì)譜儀是，前驅(qū)離子用碰撞細(xì)胞破壞產(chǎn)品離子格式-單元格MRM通過獲取數(shù)據(jù)，可以得到更高靈敏度的結(jié)果。 因?yàn)槭褂盟臉O作為碰撞室(碰撞池)內(nèi)的離子導(dǎo)向器，所以被稱為三四極。 目前“三重四極"并不是嚴(yán)格表達(dá)裝置構(gòu)成的術(shù)語，因此作為更廣義的術(shù)語，也有串聯(lián)質(zhì)譜儀的說法。
飛行時(shí)間質(zhì)譜儀
這是一種可以根據(jù)離子飛行時(shí)間進(jìn)行定性的質(zhì)譜儀。 測(cè)量離子以一定的高能量在飛行管內(nèi)加速，到達(dá)檢測(cè)器的時(shí)間。 質(zhì)量數(shù)小的快，質(zhì)量數(shù)大的慢到達(dá)檢測(cè)器，通過測(cè)量該時(shí)間可以得到小數(shù)點(diǎn)后4位的精密質(zhì)量。 使用該精密質(zhì)量可以推測(cè)化合物的結(jié)構(gòu)。 也有通過在前級(jí)組合四極，可以進(jìn)行定量和定性兩方面分析的混合質(zhì)譜儀( Q-Tof系統(tǒng))。
Xevo TQ Absolute (串聯(lián)四極質(zhì)譜儀)
Xevo G3 Q-Tof (飛行時(shí)間質(zhì)譜儀）
關(guān)于流動(dòng)相和固定相
流動(dòng)相是用于注入樣品，在色譜柱中進(jìn)行成分分離，并將該成分輸送到檢測(cè)器的液體。 主要使用有機(jī)溶劑和水。 正相使用氯仿、二氯甲烷、四氫呋喃，反相使用水、甲醇、乙腈等。
另外，固定相指色譜柱，是將樣品按成分分離的地方。
色譜柱有很多種，根據(jù)樣品的極性、pH、官能團(tuán)的種類來區(qū)分使用。 作為代表性的列ODS列( Octa Decyl Silyl Column別名C18列)。反相色譜法在中被用作第一選擇的色譜柱。
固定相(柱)
流動(dòng)相
分離方法
HPLC有各種分離方法。 需要根據(jù)樣品的特性改變分離方法。 極性高樣品時(shí)為反相色譜，極性低的樣品時(shí)為反相色譜順相色譜法聚合物的分析使用凝膠滲透色譜等。 分別進(jìn)行說明。
反相色譜法
樣品的疏水性是根據(jù)的差異來區(qū)分的分離方法。 是HPLC中的手法。 固定相中含有聚合物等弱極性的填充劑來修改選定線條的屬性。 作為代表性的東西，ODS柱經(jīng)常被使用。 流動(dòng)相使用甲醇、乙腈作為溶出力強(qiáng)的溶劑，水作為溶出力弱的溶劑。
順相色譜法
樣品的親水性是根據(jù)的差異來區(qū)分的分離方法。 固定相使用硅膠等高極性的填充劑。 流動(dòng)相中使用氯仿、乙酸乙酯作為溶出力強(qiáng)的溶劑，使用己烷等作為溶出力弱的溶劑。 順相色譜的流動(dòng)相中含有的極少量的水等可能會(huì)對(duì)分析結(jié)果產(chǎn)生較大的影響。
凝膠滲透色譜( GPC )
這是Gel Permeation Chromatography的縮寫，是確認(rèn)分子量分布的分離方法，主要用于化學(xué)工業(yè)領(lǐng)域的聚合物分析等。 流動(dòng)相使用能很好溶解樣品的溶劑。 固定相中有樣品分子的大小泊爾使用大小的柱。 GPC分析中基本上沒有標(biāo)準(zhǔn)品，所以主要使用聚苯乙烯等作為標(biāo)準(zhǔn)品，用聚苯乙烯換算來數(shù)值化分子量。
| 分離模式 | 固定相 | 流動(dòng)相 | 特征 |
|---|
| 順相 | 硅膠等 | 六氯甲烷等 | 脂溶性成分的分離 |
| 反相 | ODS(C18 )等 | 水甲醇等 | 常用的手法 |
| GPC | 聚合物等 | THF甲苯等 | 分子量分布測(cè)定 |
分離方法的特長(zhǎng)
分析結(jié)果
用HPLC分析的結(jié)果用如下色譜圖表示。 縱軸為峰值強(qiáng)度，橫軸為橫軸保持時(shí)間顯示。 利用該峰強(qiáng)度和保持時(shí)間進(jìn)行定量及定性。
定量
使用標(biāo)準(zhǔn)品改變濃度進(jìn)行分析，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。 分析樣品時(shí)，根據(jù)峰面積值位于標(biāo)準(zhǔn)曲線的哪個(gè)位置，可以相對(duì)求出濃度。
色譜圖
標(biāo)準(zhǔn)曲線
定性
通過比較標(biāo)準(zhǔn)樣品中各組分的保留時(shí)間和樣品色譜圖的保留時(shí)間進(jìn)行定性。
HPLC引進(jìn)領(lǐng)域
HPLC在所有領(lǐng)域都有使用。
制藥:在藥品的質(zhì)量管理中，必須使用HPLC進(jìn)行業(yè)務(wù)。
食品:用于食品中的成分分析(糖或氨基酸)。
化學(xué)工業(yè): GPC用于聚合物等的合成確認(rèn)。
更新時(shí)間：2023-08-24 
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